Ukončené granty:

  • Studium vlivu exogenního chemického stresu na procesy v membráně kvasinek pomocí fluorescenčních sond

    Grantová agentura: GAUK
    Identifikační číslo grantu: GAUK 135109
    Hlavní řešitel: RNDr. Andrea Drietomská
    Spoluřešitelé: doc. RNDr. Dana Gášková, CSc.

    Annotace grantu

    Hlavní náplní projektu je studium mechanizmů činnosti membránových transportérů v intaktních buňkách kvasinek Saccharomyces cerevisiae a jejich odpověď na chemický stres. Pozornost bude věnována především a) MDR pumpám (Multidrug resistance pumps), což jsou transportní proteiny zodpovědné za rezistenci buněk vůči širokému spektru látek, mj. i mnoha léků, b)H+-ATPáze, protonové pumpě, která kontrojule důležité fyziologické procesy uvnitř buňky. Chemický stres budou představovat látky užívané v medicíně nebo v zemědělství, jako např. antibiotika, cytostatika, fungicidy a protonofory. Bude porovnán vliv struktury různých analogů vybraného chemického stresoru/stresorů na aktivitu membránových transportérů. Dále bude stanoven vliv zvoleného stresu na buňky v závislosti na různých podmínkách (stáří kultury, zdroj uhlíku, koncentrace stresorů, atd.), a bude určeno, jestli dochází k inhibici, aktivaci nebo inaktivaci membránových transportérů, případně k poškození membránové struktury. Odpověď buněk na stres bude sledována především pomocí fluorescenční metody založené na použití redistribuční potenciometrické fluorescenční sondy diS-C3(3), která je zároveň susbtrátem dvou významných MDR pump v kvasinkách. Vzhledem k podobnosti kvasinkových MDR pump s membránovými proteiny živočichů či patogenních mikroorganismů (zodpovědnými za rezistenci k antibiotikům, cytostatikům atd.), mohou mít výsledky i praktický význam v oblasti medicíny, ochrany životního prostředí nebo zemědělství.

  • Použití molekulárních sond pro studium vlivu stresových faktorů na činnost mikrobiálních membránových transportních systémů

    Grantová agentura: GAUK
    Identifikační číslo grantu: GAUK 67407
    Hlavní řešitel: RNDr. Marie Kodedová, Ph.D.
    Spoluřešitelé: doc. RNDr. Dana Gášková, CSc.

    Annotace grantu

    Projekt je zaměřen na stanovení stresem indukovaných změn v činnosti membránových transportních systémů kvasinek a bakterií, zejména MDR pump zodpovědných mj. za rezistenci mikrobiálních patogenů vůči antibiotikům. Vliv bioaktivních látek/stresorů (lysozomotropní aminoestery, bispyridinaminy, imunomodulátory) na membránový potenciál a činnost MDR pump kvasinky Saccharomyces cerevisiae a bakterie Escheria coli bude stanoven v reálném čase analýzou fluorescenční odpovědi fluorescenční sondy diS-C3(3), která je substrátem těchto pump. Určí se, zda pozorovaná inhibice pump je kompetitivní, nebo zda zahrnuje inaktivaci pum. Fluorescenční mikroskopie (barvení calcofluorem a rhodamin-falloidinem) stanoví změny buněčné stěny a cytoskeletu vyvolané působením stresoru, proudová cytometrie bude použita pro sledování potenciálu na mitochondriální membráně kvasinek. Vliv chemického stresu na vitalitu a přežití buněk bude stanoven výsevovými testy, měřením respirace a acidifikační síly kvasinek, elastický rozptyl světla ukáže změny v agregačních vlastnostech a/nebo poškození kvasinkových buněk vyvolané stresory. Bude zavedeno rychlé poměrové vyhodnocení barvicích křivek a poměrová metoda bude zkalibrována. Budou provedeny srovnávací experimenty s jinými fluorescenčními sondami a vytvořeny experimentální protokoly pro nové fluorescenční (mnohabarevné) techniky. Bude porovnána činnost MDR pump kvasinek a bakterií rostoucích na pevných a v kapalných médiích a určen vliv složení kultivačního média kvasinek na membránový potenciál a aktivitu MDR pump.